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进入细胞的别样途径

日期:2014-09-25 00:00:00

细胞生物学家往往需要将外源分子送入细胞进行研究,比如质粒DNA或siRNA。化学试剂、电穿孔和病毒递送系统是目前最常用的三种途径。递送方法的选择主要取决于目标细胞的类型,需要递送的分子,以及研究所需的转染效率。

化学转染试剂旨在减少细胞对核酸的排斥(二者都带负电荷),促使细胞膜通过胞吞、胞饮或融合摄入外源物质。对于容易培养和转染的细胞系来说,传统的化学和物理转染(如电穿孔)就已经足够了。不过化学试剂往往对细胞有毒,转染原代细胞、干细胞或者其他难转染细胞的效率也比较低。虽然病毒递送对许多细胞类型的效率很高,但使用起来比较麻烦,还需要采取特殊的防护措施,对操编辑的专业要求也比较高。

Exo-Fect是一种非脂质体的转染试剂,可将核酸(包括质粒DNA、mRNA、microRNA和siRNA)直接送入事先分离到的胞外体exosome。胞外体是细胞分泌出来进行通讯的小囊泡,能够与其他细胞融合或者经由内吞作用被细胞内化。

这个转染方案非常简单,用户先将胞外体、核酸以及Exo-Fect试剂混合在一起,在37度下加热10分钟,然后在冰上冷却半小时。之后可以用另一个试剂将胞外体沉淀下来,将其与转染试剂和未转染的核酸分离。完成整个过程大约需要45分钟,每个转染反应需要约一百万胞外体(应该足以处理六孔板中两个孔的细胞)。

胞外体介导的递送是无毒的,没有引起细胞死亡。胞外体可以递送不同类型核酸的混合物。Exo-Fect转染试剂盒中含有一个荧光标记的非靶向性siRNA,可以用来监控转染和核酸递送的效果。
 

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